Ředění agaru - Agar dilution
Agarové ředění je jednou ze dvou metod (spolu s Broth Dilution) používaných vědci k určení minimální inhibiční koncentrace (MIC) antibiotik. Jedná se o ředicí metodu, která se nejčastěji používá k testování účinnosti nových antibiotik, když je několik antibiotik testováno na velkém panelu různých bakterií.
Proces
Antibiotikum, které má být testováno, se zředí vodou za vzniku řady koncentrací. Vhodný objem se poté spojí s roztaveným agarem za vzniku destiček, ve kterých konečné koncentrace antibiotika představují dvojnásobnou sérii ředění. Poté, bakterie připraveny standardní koncentraci se přidá jako skvrna na každé desce, s 10 4jednotky tvořící kolonie (CFU) na místo. Tato technika umožňuje testovat replikované skvrny jednoho bakteriálního typu nebo skvrny různých bakterií, takže lze testovat MIC antibiotika proti více typům bakterií. Nezbytné kontroly zahrnují kontrolní destičku, která nedostává žádná antibiotika, a bakteriální rozptylovací destičky, které prokazují, že bakteriální inokula je ve správném rozmezí koncentrací. Ředicí desky se poté inkubují při teplotě 37 stupňů Celsia . Destičky se poté inkubují šestnáct až osmnáct hodin, i když inkubační doba může být u bakteriálních populací, které se rychle dělí, kratší. Po inkubaci se destičky zkoumají, aby se zjistilo, zda došlo k růstu bakterií v naočkovaných místech. Nejnižší koncentrace antibiotik, která zabránila růstu bakterií, se považuje za minimální inhibiční koncentraci tohoto antibiotika proti dané bakterii.
Výhody
Ředění agaru je považováno za zlatý standard testování citlivosti nebo za nejpřesnější způsob měření rezistence bakterií na antibiotika. Výsledky ředění na agaru jsou snadno reprodukovatelné a lze je sledovat za mnohem levnější cenu, než jakou vyžadují jiné metody ředění. Navíc lze testovat až třicet vzorků patogenů (plus dvě kontroly) najednou, takže ředění agaru je užitečné pro dávkové testy.
Nevýhody
Každá ředicí destička při testování na agaru musí být ručně naočkována testovaným patogenem, takže testování na ředění agaru je jak pracné, tak nákladné. Na rozdíl od bujónových mikrodilučních testů nelze agarové ředění použít k testování více než jednoho antibiotika najednou.