CCR5 - CCR5

CCR5
CCR5+membrána1.png
Dostupné struktury
PDB Hledání ortologů : PDBe RCSB
Identifikátory
Přezdívky CCR5 , CC-CKR-5, CCCKR5, CCR-5, CD195, CKR-5, CKR5, CMKBR5, IDDM22, CC motiv chemokinový receptor 5 (gen/pseudogen), CC motiv chemokinový receptor 5
Externí ID OMIM : 601373 MGI : 107182 HomoloGene : 37325 Genové karty : CCR5
Ortology
Druh Člověk Myš
Entrez
Ensembl
UniProt
RefSeq (mRNA)

NM_001100168
NM_000579
NM_001394783

NM_009917

RefSeq (protein)

NP_000570
NP_001093638

NP_034047

Umístění (UCSC) Chr 3: 46,37 - 46,38 Mb Chr 9: 124,12 - 124,15 Mb
Hledání PubMed
Wikidata
Zobrazit/upravit člověka Zobrazit/upravit myš
Připojení HIV k pomocné buňce CD4+ T: 1) virový protein gp120 se váže na CD4. 2) variabilní smyčka gp120 se připojí k koreceptoru, buď CCR5 nebo CXCR4. 3) HIV vstupuje do buňky.

CC chemokinový receptor typu 5 , také známý jako CCR5 nebo CD195 , je protein na povrchu bílých krvinek, který se podílí na imunitním systému, protože funguje jako receptor pro chemokiny .

U lidí je gen CCR5, který kóduje protein CCR5, umístěn na krátkém (p) rameni v poloze 21 na chromozomu 3 . Některé populace zdědily mutaci Delta 32 , což vedlo ke genetické deleci části genu CCR5. Homozygotní nosiče této mutace jsou rezistentní k M-tropní kmeny z HIV-1 infekce .

Funkce

CCR5 protein patří do beta chemokinových receptorů rodiny integrálních membránových proteinů . Jedná se o receptor spojený s proteinem G, který funguje jako chemokinový receptor ve skupině CC chemokinů .

Příbuzné CCR5 je ligandy zahrnují CCL3 , CCI4 (také známý jako MIP 1 alfa a 1 p , v tomto pořadí), a CCL3L1 . CCR5 dále interaguje s CCL5 ( chemotaktický cytokinový protein známý také jako RANTES).

CCR5 je převážně exprimován na T buňkách , makrofágech , dendritických buňkách , eozinofilech , mikrogliích a subpopulaci buněk rakoviny prsu nebo prostaty. Exprese CCR5 je selektivně indukována během procesu transformace rakoviny a není exprimována v normálních epiteliálních buňkách prsu nebo prostaty. Přibližně 50% rakoviny prsu u člověka exprimovalo CCR5, primárně u trojnásobně negativního karcinomu prsu. Inhibitory CCR5 blokovaly migraci a metastázy buněk rakoviny prsu a prostaty, které exprimovaly CCR5, což naznačuje, že CCR5 může fungovat jako nový terapeutický cíl. Nedávné studie naznačují, že CCR5 je exprimován v podskupině rakovinotvorných buněk s charakteristikou rakovinotvorných kmenových buněk, o nichž je známo, že zvyšují odolnost vůči terapii, a že inhibitory CCR5 zvyšují počet buněk usmrcených současnou chemoterapií. Je pravděpodobné, že CCR5 hraje roli v zánětlivých reakcích na infekci, i když jeho přesná role v normální imunitní funkci není jasná. Oblasti tohoto proteinu jsou také klíčové pro vazbu chemokinového ligandu, funkční odpověď receptoru a aktivitu HIV-receptoru HIV.

Sekvence primárního proteinu

HIV

HIV-1 nejčastěji používá chemokinové receptory CCR5 a/nebo CXCR4 jako koreceptory pro vstup do cílových imunologických buněk. Tyto receptory jsou umístěny na povrchu hostitelských imunitních buněk, přičemž poskytují způsob vstupu viru HIV-1 k infikování buňky. Obalová glykoproteinová struktura obalu HIV-1 je nezbytná pro umožnění virového vstupu HIV-1 do cílové hostitelské buňky. Struktura obalového glykoproteinu se skládá ze dvou proteinových podjednotek štěpených z prekurzoru proteinu Gp160 kódovaného genem HIV-1 env : vnější podjednotky Gp120 a transmembránové podjednotky Gp41. Tato obalová glykoproteinová struktura je uspořádána do hrotovité struktury umístěné na povrchu virionu a sestává z trimeru hetero-dimerů Gp120-Gp41. Obalový protein Gp120 je chemokinový mimik. Ačkoli postrádá jedinečnou strukturu chemokinu, je stále schopen se vázat na chemokinové receptory CCR5 a CXCR4. Během infekce HIV-1 se podjednotka obalového glykoproteinu Gp120 váže na glykoprotein CD4 a ko-receptor HIV-1 exprimovaný na cílové buňce za vzniku heterotrimerního komplexu. Tvorba tohoto komplexu stimuluje uvolňování fusogenního peptidu, což způsobuje fúzi virové membrány s membránou cílové hostitelské buňky. Protože vazba na samotný CD4 může někdy vést k uvolňování gp120, musí se gp120 dále vázat na kopreceptor CCR5, aby fúze pokračovala. Tyrosinem sulfátovaný aminokonec tohoto ko-receptoru je "základním determinantem" vazby na glykoprotein gp120. Kokoreceptor také rozpoznává oblast V1-V2 gp120 a přemosťující arch (antiparalelní, 4vláknový β list, který spojuje vnitřní a vnější domény gp120). Kmen V1-V2 může ovlivnit „využití koreceptorů prostřednictvím složení peptidů a také stupněm N-vázané glykosylace“. Na rozdíl od V1-V2 je však smyčka V3 vysoce variabilní, a proto je nejdůležitějším determinantem specificity kokoreceptoru. Normální ligandy pro tento receptor, RANTES , MIP-1β a MIP-1α , jsou schopné in vitro potlačit infekci HIV-1 . U jedinců infikovaných HIV jsou viry využívající CCR5 převládajícím druhem izolovaným v raných stádiích virové infekce, což naznačuje, že tyto viry mohou mít selektivní výhodu během přenosu nebo akutní fáze onemocnění. Navíc alespoň polovina všech infikovaných jedinců v průběhu infekce uchovává pouze viry využívající CCR5.

CCR5 je primární koreceptor používaný gp120 sekvenčně s CD4. Toto navázání vede k tomu, že se gp41, další proteinový produkt gp160, uvolní ze své metastabilní konformace a vloží se do membrány hostitelské buňky. Ačkoli to nebylo potvrzeno, vazba gp120-CCR5 zahrnuje dva klíčové kroky: 1) Tyrosinem sulfátovaný aminokonec tohoto ko-receptoru je „základním determinantem“ vazby na gp120 (jak bylo uvedeno výše) 2) Následující krok 1 . mezi gp120 a transmembránovými doménami CCR5 musí existovat vzájemná akce (synergie, interkomunikace).

CCR5 je nezbytný pro šíření kmene R5 viru HIV-1. Znalost mechanismu, kterým tento kmen HIV-1 zprostředkovává infekci, podnítila výzkum vývoje terapeutických intervencí k blokování funkce CCR5. Řada nových experimentálních léků proti HIV, nazývaných antagonisté CCR5 receptorů , byla navržena tak, aby interferovala s vazbou mezi obalovým proteinem Gp120 a CC-receptorem HIV co-receptoru. Mezi tyto experimentální léky patří PRO140 ( CytoDyn ), Vicriviroc (studie fáze III byly zrušeny v červenci 2010) ( Schering Plough ), Aplaviroc (GW-873140) ( GlaxoSmithKline ) a Maraviroc (UK-427857) ( Pfizer ). Maraviroc byl schválen pro použití FDA v srpnu 2007. Je jediným dosud schváleným FDA pro klinické použití, čímž se stal prvním inhibitorem CCR5. Problém tohoto přístupu spočívá v tom, že ačkoliv je CCR5 hlavním koreceptorem, kterým HIV infikuje buňky, není jediným takovým koreceptorem. Je možné, že se pod selektivním tlakem HIV vyvine k použití jiného ko-receptoru. Zkoumání virové rezistence na AD101, molekulární antagonisty CCR5, však ukázalo, že rezistentní viry nepřešly na jiný co-receptor (CXCR4), ale přetrvávaly v používání CCR5: buď se navázaly na alternativní domény CCR5 nebo na receptor na vyšší afinita. Protože je však ještě k dispozici další kopreceptor, je pravděpodobné, že nedostatek genu CCR5 neučiní imunitu vůči viru; jednoduše by pro jednotlivce bylo náročnější ji uzavřít. Virus má také stále přístup k CD4. Na rozdíl od CCR5, který není vyžadován (jak dokládají ti, kteří žijí zdravým životem, i když chybí gen v důsledku mutace delta32), CD4 je v imunitním obranném systému těla rozhodující. I bez dostupnosti buď ko-receptoru (dokonce CCR5) může virus stále napadat buňky, pokud by gp41 prošel změnou (včetně jeho cytoplazmatického ocasu), která vedla k nezávislosti CD4 bez potřeby CCR5 a/nebo CXCR4 jako vchod.

Rakovina

Exprese CCR5 je indukována v epiteliálních buňkách prsu a prostaty po transformaci. Indukce exprese CCR5 podporuje buněčnou invazi, migraci a metastázy. Indukce metastáz zahrnuje navádění na místo metastázy. Bylo ukázáno, že inhibitory CCR5 včetně maraviroku a leronlimabu blokují plicní metastázy buněčných linií lidských rakovin prsu. V preklinických studiích imunitně kompetentních myší blokovaly inhibitory CCR5 metastázy do kostí a mozku. Inhibitory CCR5 také snižují infiltraci nádorově asociovaných makrofágů. Klinická studie fáze 1 inhibitoru CCR5 u silně předléčených pacientů s metastatickým karcinomem tlustého střeva prokázala objektivní klinickou odpověď a snížení zátěže metastatickým nádorem.

Mozek

Zvýšené hladiny CCR5 jsou součástí zánětlivé reakce na mrtvici. Blokování CCR5 přípravkem Maraviroc (lék schválený pro HIV) může zlepšit zotavení po mrtvici.

V rozvíjejícím se mozku ovlivňují chemokiny, jako je CCR5, migraci a spojení neuronů. Po mrtvici se zdá, že snižují počet míst připojení na neuronech poblíž poškození.

CCR5-Δ32

CCR5-A32 (nebo CCR5-D32 nebo CCR5 delta 32) je alelou CCR5.

CCR5 A32 je delece 32 párů bází, která zavádí předčasný stop kodon do lokusu receptoru CCR5, což vede k nefunkčnímu receptoru. Pro vstup viru M-tropic HIV-1 je vyžadován CCR5. Jedinci homozygotní (označovaní Δ32/Δ32) pro CCR5 Δ32 neexprimují funkční receptory CCR5 na svých buněčných površích a jsou odolní vůči infekci HIV-1 , a to navzdory více rizikovým expozicím. Jedinci heterozygotní (+/A32) pro mutantní alelu mají více než 50% redukci funkčních receptorů CCR5 na jejich buněčných površích v důsledku dimerizace mezi mutantními a divokými receptory, která interferuje s transportem CCR5 na povrch buňky. Nosiče heterozygotů jsou vůči divokým typům rezistentní na infekci HIV-1 a při infekci vykazují heterozygoti sníženou virovou zátěž a o 2–3 roky pomalejší progresi k AIDS ve srovnání s divokými typy. Heterozygotnost pro tuto mutantní alelu také ukázala zlepšení virologické odpovědi na antiretrovirovou léčbu. CCR5 Δ32 má v Evropě frekvenci alel (heterozygotů) 10% a frekvenci homozygotů 1%.

Nedávný výzkum naznačuje, že CCR5 Δ32 zlepšuje poznávání a paměť. V roce 2016 vědci ukázali, že odstranění genu CCR5 z myší výrazně zlepšilo jejich paměť. CCR5 je silný supresor neuronální plasticity, učení a paměti; Nadměrná aktivace CCR5 virovými proteiny může přispět k kognitivním deficitům spojeným s HIV.

Evoluční historie a věk alely

Alela CCR5 A32 je pozoruhodná svým nedávným původem, neočekávaně vysokou frekvencí a odlišnou geografickou distribucí, což dohromady naznačuje, že (a) vzešlo z jediné mutace a (b) bylo historicky předmětem pozitivní selekce.

Dvě studie použily vazebnou analýzu k odhadu stáří delece CCR5 Δ32 za předpokladu, že množství rekombinace a mutace pozorované v genomových oblastech obklopujících deleci CCR5 Δ32 by bylo úměrné věku delece. Pomocí vzorku 4000 jedinců z 38 etnických populací Stephens et al. odhadoval, že k deleci CCR5-Δ32 došlo před 700 lety (275-1875, 95% interval spolehlivosti). Další skupina, Libert et al. (1998), pomocí mikrosatelitních mutací odhadli věk mutace CCR5 Δ32 na 2100 let (700-4800, 95% interval spolehlivosti). Na základě pozorovaných rekombinačních událostí odhadli věk mutace na 2250 let (900-4700, 95% interval spolehlivosti). Třetí hypotéza se opírá o gradient alelové frekvence v Evropě od severu k jihu, který ukazuje, že nejvyšší frekvence alel se vyskytovala v severských zemích a nejnižší frekvence alel v jižní Evropě. Protože Vikingové historicky okupovali tyto země, je možné, že se alela rozšířila po celé Evropě kvůli vikingskému rozptýlení v 8. až 10. století. Vikingy později v Rusku nahradili Varangiáni , což možná přispělo k pozorovanému klusu alel s frekvencí východ-západ.

HIV-1 byl zpočátku přenášen od šimpanzů ( Pan troglodytes ) na člověka počátkem 20. století v jihovýchodním Kamerunu v Africe prostřednictvím expozice infikované krvi a tělním tekutinám při masakru keře. HIV-1 však v Evropě do 80. let 20. století účinně chyběl. S ohledem na průměrný věk zhruba 1000 let pro alelu CCR5-Δ32 lze tedy stanovit, že HIV-1 nevyvíjel selekční tlak na lidskou populaci dostatečně dlouho, aby dosáhl současných frekvencí. Proto byly jako činidla pozitivní selekce pro CCR5 Δ32 navrženy jiné patogeny, včetně dýmějového moru ( Yersinia pestis ) a neštovic ( Variola major ). Další údaje naznačují, že alelová frekvence zaznamenala negativní selekční tlak v důsledku patogenů, které se během římské expanze rozšířily. Myšlenka, že negativní selekce hrála roli v nízké frekvenci alely, je také podpořena experimenty s použitím knockoutovaných myší a chřipky A, které prokázaly, že přítomnost receptoru CCR5 je důležitá pro efektivní reakci na patogen.

Důkaz pro jedinou mutaci

Několik důkazů naznačuje, že alela CCR5 Δ32 se vyvinula pouze jednou. Za prvé, CCR5 Δ32 má relativně vysokou frekvenci v několika různých evropských populacích, ale v asijských, středovýchodních a indiánských populacích poměrně chybí, což naznačuje, že k jedné mutaci došlo po odlišnosti Evropanů od jejich afrického předka. Za druhé, analýza genetické vazby naznačuje, že k mutaci dochází na homogenním genetickém pozadí, což znamená, že dědičnost mutace nastala od společného předka. To bylo prokázáno ukázáním, že alela CCR5 A32 je v silné nerovnováze vazby s vysoce polymorfními mikrosatelity. Více než 95% chromozomů CCR5 Δ32 také neslo alelu IRI3.1-0, zatímco 88% neslo alelu IRI3.2. Naproti tomu mikrosatelitní markery IRI3.1-0 a IRI3.2-0 byly nalezeny pouze ve 2 nebo 1,5% chromozomů nesoucích alelu divokého typu CCR5. Tento důkaz nerovnováhy vazeb podporuje hypotézu, že většina, ne -li všechny, alely CCR5 Δ32 pocházejí z jediné mutační události. Alela CCR5 Δ32 má jedinečné geografické rozložení, které indikuje jediný severní původ následovaný migrací. Studie měřící frekvence alel u 18 evropských populací zjistila gradient sever-jih, přičemž nejvyšší frekvence alel jsou ve finské a mordvinské populaci (16%) a nejnižší na Sardinii (4%).

Pozitivní výběr

Při absenci selekce by podle odhadů jedna mutace vzrostla na 127 500 let na frekvenci populace 10%. Odhady založené na rychlosti genetické rekombinace a mutace uvádějí věk alely mezi 1 000 a 2 000 lety. Tato nesrovnalost je podpisem pozitivního výběru.

Odhaduje se, že HIV-1 vstoupil do lidské populace v Africe na počátku 20. století; symptomatické infekce však byly hlášeny až v 80. letech minulého století. Epidemie HIV-1 je proto příliš mladá na to, aby mohla být zdrojem pozitivní selekce, která za 2000 let řídila frekvenci CCR5 Δ32 z nuly na 10%. Stephens a kol. (1998), naznačují, že dýmějový mor ( Yersinia pestis ) vyvíjel pozitivní selektivní tlak na CCR5 Δ32. Tato hypotéza byla založena na načasování a závažnosti pandemie černé smrti, která zabila 30% evropské populace všech věkových kategorií v letech 1346 až 1352. Po černé smrti došlo k méně závažným, občasným epidemiím. Jednotlivá města zaznamenala vysokou úmrtnost, ale celková úmrtnost v Evropě byla jen několik procent. V letech 1655-1656 zabila druhá pandemie nazvaná „Velký mor“ 15–20% evropské populace. Důležité je, že morové epidemie byly přerušované. Bubonický mor je zoonotická nemoc, primárně infikuje hlodavce, šíří se blechami a jen občas nakazí lidi. Infekce bubonického moru z člověka na člověka se nevyskytuje, i když se může objevit v pneumonickém moru, který infikuje plíce. Pouze když je hustota hlodavců nízká, jsou infikované blechy nuceny živit se alternativními hostiteli, jako jsou lidé, a za těchto okolností může dojít k lidské epidemii. Na základě populačních genetických modelů Galvani a Slatkin (2003) tvrdí, že přerušovaný charakter morových epidemií nevytvářel dostatečně silnou selektivní sílu k řízení alelové frekvence CCR5 Δ32 až 10% v Evropě.

K otestování této hypotézy modelovali Galvani a Slatkin (2003) historické selekční tlaky způsobené morem a neštovicemi. Mor byl modelován podle historických záznamů, zatímco věkově specifická úmrtnost na neštovice byla získána z věkového rozložení pohřbů neštovic v Yorku (Anglie) mezi 1770 a 1812. Neštovice přednostně infikují mladé, pre-reprodukční členy populace, protože jsou jedinými jedinci, kteří nejsou imunizováni ani mrtví na infekci v minulosti. Protože neštovice přednostně zabíjejí pre-reprodukční členy populace, vytváří silnější selektivní tlak než mor. Na rozdíl od moru neštovice nemají zvířecí rezervoár a přenášejí se pouze z člověka na člověka. Autoři spočítali, že pokud by mor vybíral pro CCR5 Δ32, frekvence alely by byla stále menší než 1%, zatímco neštovice vyvíjely selektivní sílu dostatečnou k dosažení 10%.

Hypotéza, že neštovice vykazovaly pozitivní selekci na CCR5 Δ32, je také biologicky věrohodná, protože poxviry, jako HIV, vstupují do bílých krvinek pomocí chemokinových receptorů. Naproti tomu Yersinia pestis je bakterie s velmi odlišnou biologií.

Ačkoli Evropané jsou jedinou skupinou, která má subpopulace s vysokou frekvencí CCR5 Δ32, nejsou jedinou populací, která byla podrobena selekci neštovic, která měla celosvětové rozšíření, než byla v roce 1980 prohlášena za vymýcenou. Nejčasnější nezaměnitelné popisy neštovice se objevují v 5. století n. l. v Číně, 7. století n. l. v Indii a ve Středomoří a v 10. století n. l. v jihozápadní Asii. Naproti tomu CCR5 Δ 32 mutace se vyskytuje jen v evropské, západní asijských, a populace Severní Afriky. Zdá se, že neobvykle vysoká frekvence CCR5 Δ32 v těchto populacích vyžaduje jedinečný původ v severní Evropě a následnou selekci neštovic.

Potenciální náklady

CCR5 Δ32 může být pro hostitele prospěšný u některých infekcí (např. HIV-1, možná neštovice), ale u jiných škodlivý (např. Klíšťová encefalitida, virus West Nile). Zda je funkce CCR5 v kontextu dané infekce nápomocná nebo škodlivá, závisí na komplexní souhře mezi imunitním systémem a patogenem.

Výzkum obecně naznačuje, že mutace CCR5 Δ32 může hrát škodlivou roli v postinfekčních zánětlivých procesech, které mohou poranit tkáň a vytvořit další patologii. Nejlepší důkaz pro tuto navrhovanou antagonistickou pleiotropii je u infekcí způsobených flaviviry . Obecně je mnoho virových infekcí asymptomatické nebo u velké většiny populace vyvolává pouze mírné příznaky. Někteří nešťastní jedinci však prožívají obzvláště destruktivní klinický průběh, který je jinak nevysvětlen, ale zdá se, že je geneticky zprostředkován. Bylo zjištěno, že pacienti homozygotní pro CCR5 Δ32 mají vyšší riziko neuroinvazivní formy klíšťové encefalitidy (flavivirus). Kromě toho může být vyžadován funkční CCR5 k prevenci symptomatických onemocnění po infekci virem West Nile , dalším flavivirem; CCR5 Δ32 byl spojen s časným vývojem symptomů a výraznějšími klinickými projevy po infekci západonilským virem.

Toto zjištění u lidí potvrdilo dříve pozorovaný experiment na zvířecím modelu homozygotnosti CCR5 Δ32. Po infekci západonilským virem měly myši CCR5 Δ32 výrazně zvýšené virové titry v centrálním nervovém systému a měly zvýšenou úmrtnost ve srovnání s divokými myší, což naznačuje, že exprese CCR5 byla nezbytná k vytvoření silné obrany hostitele proti viru západonilské horečky .

Lékařské aplikace

Genetický přístup zahrnující nitrobrany, které blokují expresi CCR5, byl navržen jako léčba jedinců infikovaných HIV-1 . Když se T-buňky modifikují tak, že již neexprimují CCR5, byly smíchány s nemodifikovanými T-buňkami exprimujícími CCR5 a poté vystaveny infekci HIV-1, modifikované T-buňky, které neexprimují CCR5, nakonec převezmou kulturu jako HIV-1 zabíjí nemodifikované T-buňky. Stejnou metodu lze použít in vivo k vytvoření fondu buněk odolných vůči virům u infikovaných jedinců.

Tato hypotéza byla testována u pacienta s AIDS, u kterého se také vyvinula myeloidní leukémie , a byl léčen chemoterapií k potlačení rakoviny. K obnovení imunitního systému pak byla použita transplantace kostní dřeně obsahující kmenové buňky od vhodného dárce. Transplantace však byla provedena od dárce se 2 kopiemi genu mutace CCR5-A32. Po 600 dnech byl pacient zdravý a měl nezjistitelné hladiny HIV v krvi a ve vyšetřovaných tkáních mozku a konečníku. Před transplantací byly také detekovány nízké hladiny HIV X4 , který nepoužívá receptor CCR5. Po transplantaci však nebyl detekován ani tento typ HIV. Tento výsledek je však v souladu s pozorováním, že buňkám exprimujícím variantní protein CCR5-A32 chybí jak receptory CCR5, tak CXCR4 na jejich povrchu, což uděluje rezistenci širokému spektru variant HIV včetně HIVX4. Po více než šesti letech si pacient zachoval odolnost vůči HIV a byl prohlášen za vyléčeného z infekce HIV.

Zápis HIV pozitivních pacientů do klinické studie byl zahájen v roce 2009, kdy byly pacientovy buňky geneticky modifikovány nukleázou zinkového prstu, aby nesly znak CCR5-Δ32, a poté byly znovu zavedeny do těla jako potenciální léčba HIV. Výsledky hlášené v roce 2014 byly slibné.

StemCyte, inspirovaný prvním člověkem, který byl kdy vyléčen z HIV, The Berlin Patient , zahájil spolupráci s bankami pupečníkové krve na celém světě, aby od roku 2011 systematicky prováděl screening vzorků pupečníkové krve na mutaci CCR5.

V listopadu 2018 Jiankui oznámil, že upravil dvě lidská embrya, aby se pokusil deaktivovat gen pro CCR5, který kóduje receptor, který HIV používá pro vstup do buněk. Řekl, že dvojčata, Lulu a Nana , se narodila o několik týdnů dříve a že dívky stále nosí funkční kopie CCR5 spolu s postiženým CCR5 ( mozaika ), a proto jsou stále náchylné k HIV. Práce byla široce odsouzena jako neetická, nebezpečná a předčasná.

Viz také

Reference

Další čtení

externí odkazy