MELISA - MELISA
MELISA® ( Memory lymfocytu Imunostimulace Assay ) je krevní test, který detekuje typ IV přecitlivělost na kovy, chemikálie, environmentálních toxinů a plísní. Reakce přecitlivělosti typu IV, zejména na nikl, jsou dobře zavedené a mohou postihnout 20% populace.
Mechanismus
Test MELISA měří zpožděnou hypersenzitivní reakci typu IV. Reakce typu IV jsou zprostředkovány T-lymfocyty (nebo paměťovými lymfocyty), které měly předchozí kontakt s daným alergenem. To je na rozdíl od alergie typu I, která je zprostředkována protilátkami IgE a často se testuje pomocí testu ELISA . U geneticky predisponovaných jedinců může pokračující expozice alergenům vyvolat přecitlivělost typu IV.
Test MELISA je buněčná kultura a vyžaduje živé paměťové lymfocyty. Lymfocyty jsou izolovány ze vzorku krve a kultivovány v inkubátoru po dobu pěti dnů. Část krve je udržována neporušená (nevystavená alergenům), aby sloužila jako negativní kontrola. Druhá část je vystavena univerzálnímu alergenu Pokeweed , který slouží jako pozitivní kontrola. Nakonec je krev vystavena podezřelým alergenům/alergenům v několika různých koncentracích, aby se zajistilo, že podmínky in vitro budou co nejvíce podobné těm in vivo. Lymfocytární reakce na každý alergen se měří dvěma oddělenými technologiemi: jeden založený na vychytávání radioaktivního izotopu , 3 H-thymidinu, dělením lymfocytů (proliferace); druhý barvením buněk a hodnocením mikroskopie. Úroveň reaktivity se měří jako stimulační index (SI) proti naivním lymfocytům z neexponovaného vzorku (negativní kontrola). Životaschopnost a reaktivita jsou určeny počtem buněk a reakcí na pozitivní kontrolu.
MELISA je optimalizovaná, standardizovaná verze testu transformace lymfocytů (LTT), který byl vyvinut na počátku šedesátých let minulého století, aby pomohl identifikovat alergie na léky, metabolity a kovy. LTT pro berylium je nyní přijímána jako zlatý standard pro diagnostiku berylliosis .
MELISA se liší od standardních LTT několika způsoby:
- MELISA používá morfologický screening k poskytnutí další úrovně přesnosti. Tím je zajištěno, že buňky nesouvisející s přecitlivělostí (např. Makrofágy) nejsou zahrnuty do radioaktivně pozitivních počtů
- MELISA používá částečně vyčerpané monocyty k replikaci rovnováhy lymfocytů/monocytů in vivo
- Melisu využívá číslo vyšší lymfocytů než ostatní LTTS (1 x 10 6 buněk). Jelikož jsou paměťové buňky relativně vzácné, zajišťuje tato vyšší koncentrace lymfocytů zlepšenou citlivost.
Aplikace
Zubní lékařství
MELISA byla dále vyvinuta, aby pomohla posoudit dopad přecitlivělosti na kovy používané ve stomatologii. Přecitlivělost na zubní kovy může být spojena s lokálními orálními reakcemi včetně orálního lichen planus, stomatitidy a ulcerace.
Frekvence reakcí lymfocytů indukovaných kovy byla zkoumána u 3 162 zubních pacientů ve třech evropských laboratořích pomocí testu MELISA. Pacienti trpěli lokálními a systémovými příznaky přičítanými jejich zubním náhradám. Účinek odstraňování zubních kovů byl studován u 111 pacientů s přecitlivělostí na kov a příznaky připomínajícími syndrom chronické únavy ( CFS ). Po konzultaci se zubním lékařem podskupina 111 pacientů, u nichž se projevila alergie na jejich zubní kovy, nahradila jejich náhrady nekovovými materiály. Nejběžnějším senzibilizátorem byl nikl, za ním následovala anorganická rtuť, zlato, fenylrtuť, kadmium a palladium. Ve srovnání s reakcemi lymfocytů u zdravých subjektů měla skupina CFS významně zvýšené reakce na několik kovů, zejména na anorganickou rtuť, fenylrtuť a zlato.
Po odstranění zubního kovu:
- 76% uvedlo dlouhodobé zlepšení zdraví
- 22% uvedlo nezměněné zdraví
- 2% uvedlo zhoršení příznaků
Ortopedie a chirurgie
Přecitlivělost na kovy typu IV je běžná, zejména na nikl, avšak komplikace související s přecitlivělostí spojené s kovovými implantáty jsou hlášeny méně často. Mezi potenciální komplikace přecitlivělosti patří kožní vyrážky, chronické bolesti kloubů, otoky, aseptické uvolnění a selhání kloubů.
Mnoho autorů dospělo k závěru, že krevní testy založené na LTT, jako je MELISA, mohou být lepší volbou pro detekci systémových alergií z implantátů, zatímco patchové testování je vhodnější pro detekci dermální přecitlivělosti. Dodávají, že testování založené na LTT může být také dobrou volbou v případech neurčité přecitlivělosti nebo u pacientů se selháním kloubu z neznámé příčiny, protože má vyšší citlivost než testování náplasti
Někteří chirurgové a výzkumníci navrhují testování LTT před chirurgickým zákrokem u pacientů s podezřením/hlášenou alergií na kov
Přecitlivělost na titan
Titan a jeho hlavní slitina (Ti6Al4V) jsou obecně považovány za hypoalergenní možnosti pro artroplastiku a zubní implantáty. Ačkoli je to neobvyklé, s prevalencí odhadovanou mezi 0,6-6,3%, byla po implantaci hlášena přecitlivělost na titan s příznaky zahrnujícími zhoršené hojení zlomenin, lokální ekzém, bolest, otok, systémovou dermatitidu, uvolnění implantátu a selhání, z nichž všechny byly údajně vyřešen odstraněním implantátu a nahrazením implantátem bez titanu
Při chirurgii páteře jsou v tkáních obklopujících implantát přítomny mikroskopické částice titanu. Tyto částice aktivují makrofágy, které zvyšují absorpci kostí a zánětlivé reakce. Uvolněné nanočástice budou cirkulovat v tělních tekutinách a nakonec se hromadí ve vzdálených orgánech.
Bylo prokázáno, že titan vyvolává klinicky relevantní přecitlivělost, kterou lze zjistit testováním MELISA. Přesnost testů náplasti na alergii na titan se zdá být proměnlivá; klinika Mayo nenašla žádné pozitivní reakce na titan za více než deset let, a to navzdory několika publikovaným případům alergie na titan.
Chronická onemocnění
Test se také používá k určení, zda alergie na kov přispívá k rozvoji chronických onemocnění, jako je CFS (Sterzl, et al., 1999) a roztroušená skleróza . Autoři předpokládají, že pokud imunitní systém neustále vykazuje alergickou reakci na kov přítomný v těle, upozorní to osu HPA vyvolávající příznaky podobné únavě. Studie (Stejskal a kol., 1999) s 930 pacienty s příznaky podobnými CFS ukázala, že 62% testovalo MELISA pozitivní na alergii na kov. Z těch, kteří odstranili nevhodné kovy, se 76% zlepšilo, ale neexistovala žádná kontrola placeba. Přecitlivělost na kovy není vědci široce uznávána jako uznávaná příčina CFS nebo roztroušené sklerózy .
Pracovní lékařství
Test MELISA se používá v pracovním lékařství a zdraví životního prostředí. Byl použit k prověření pracovníků vystavených kovům, chemikáliím nebo jiným alergenům na jejich pracovišti. K tomu byl test původně vyvinut v laboratořích Astry (nyní Astra-Zeneca) ve švédském Södertälje. V USA se podobná metoda (BeLT) běžně používá ke screeningu alergie na berylium u asymptomatických pracovníků vystavených beryliovému prachu (Mroz, et al., 1991) (Newman LS, 1996).
Doba platnosti
Zatímco dva články dospěly k závěru, že test MELISA může poskytnout falešně pozitivní (Cederbrant, et al., 1999) (Cederbrant, et al., 1997) reakce, následná studie dospěla k závěru, že test MELISA je „reprodukovatelný, citlivý, specifický a spolehlivý pro detekci citlivosti kovu na pacienty citlivé na kov. “ (Valentine-Thon & Schiawara, 2003)
Vývojáři testu MELISA tvrdí, že kritické články vypočítaly citlivost a specifičnost testů proliferace lymfocytů in vitro s použitím patch testu jako referenčního. Je dobře známo, že testování patchů může způsobit podráždění místních reakcí. Obecně se souhlasí s tím, že testy založené na LTT, jako je MELISA, jsou vhodnější pro diagnostiku citlivosti kovů souvisejících s implantáty než testování náplasti, protože vztah mezi přecitlivělostí kůže a systémovou přecitlivělostí (Ständer, et al., 2017) je špatně definován. Provádění LTT za optimalizovaných stimulačních podmínek může být užitečným doplňkovým nástrojem pro diagnostiku přecitlivělosti (Ständer, et al., 2017) (FDA, 2019). Aby se otestovalo, zda se pacienti se symptomy připisovanými zubnímu amalgámu liší od zdravých kontrol, studie srovnávala 23 pacientů s amalgámem, 30 subjektů, kteří se považovali za zdravé s amalgámy a 10 subjektů bez amalgámu pomocí MELISA a dalších testů. Vědci zjistili, že u zdravých subjektů se zubním amalgámem nebo bez něj byla získána vysoká frekvence pozitivních výsledků, a dospěli k závěru, že test nelze použít jako objektivní test na alergii na rtuť (Cederbrant, et al., 1999).
Další studie stejného kritického autora použila 34 pacientů k testování citlivosti a specificity testu MELISA a dospěla k závěru, že není užitečné pro diagnostiku kontaktní alergie na kovy zlato, palladium a nikl, protože mnoho falešně pozitivních výsledků bude získané (Cederbrant, et al., 1997). Klinický význam testu byl prokázán poklesem pacientem hlášených kovově specifických reakcí po odstranění kovů způsobujících alergii (studie však neměla kontrolu placeba). (Stejskal, et al., 2006) (Valentine-Thon, et al., 2006)