Gen markeru - Marker gene
V biologii , je markerový gen může mít několik významů. V jaderném biologii a molekulární biologie, je markerový gen je gen použit k určení, zda je sekvence nukleové kyseliny byla úspěšně vložen do organismu DNA . Zejména existují dva podtypy těchto markerových genů: selekční marker a marker pro screening . V metagenomiku a fylogenetiky , je markerový gen je ortologní gen skupina, která může být použita k vymezení mezi taxonomických linií.
Volitelná značka
Selektovatelný marker chrání organismus před selektivním činidlem, které by ho normálně zabilo nebo zabránilo jeho růstu. Při transformační reakci může DNA v závislosti na účinnosti transformace přijímat pouze jedna z několika milionů až miliard buněk. Vedle kontroly každé jednotlivé buňky používají vědci k usmrcení všech buněk, které neobsahují cizí DNA, selektivní látku a ponechávají pouze ty požadované.
Antibiotika jsou nejběžnější selektivní látky. V bakteriích se antibiotika používají téměř výlučně. V rostlinách se často používají také antibiotika, která ničí chloroplasty , ačkoli tolerance k solím a hormonům inhibujícím růst je stále populárnější. U savců se jako selektovatelný marker používá rezistence na antibiotika, která by ničila mitochondrie .
Zobrazitelná značka
Díky zobrazitelnému markeru budou buňky obsahující gen vypadat jinak. Běžně se používají tři typy screeningu:
- Zelený fluorescenční protein způsobuje, že buňky pod UV zářením září zeleně. K prohlížení jednotlivých buněk je nutný specializovaný mikroskop. K dispozici je také žlutá a červená verze, takže vědci mohou sledovat více genů najednou. Běžně se používá k měření genové exprese .
- Stanovení GUS (s použitím β-glukuronidázy ) je vynikající metodou pro detekci jedné buňky pomocí modrého obarvení bez použití jakéhokoli komplikovaného zařízení. Nevýhodou je, že buňky jsou v procesu zabíjeny. To je zvláště běžné v rostlinné vědě.
- Modrá bílá obrazovka se používá jak v bakteriích, tak v eukaryotických buňkách. Bakteriální lacZ gen kóduje enzym beta-galaktosidázu . Když médium obsahující určité galaktosidy (např. X-gal ), buňky exprimující enzym přeměňují X-gal na modrý produkt a lze je vidět pouhým okem. Strategií je tedy integrovat DNA inzert do genu lacZ a vybrat bílé kolonie, protože budou správně integrovat inzert. Modré kolonie na druhé straně budou schopny konvertovat X-gal a vést k modré sraženině, protože DNA inzert se buď neintegroval vůbec, nebo ne na správném místě v plazmidu .