Konverze vyvolaná zemětřesením v reálném čase- Real-time quaking-induced conversion
Konverze vyvolaná zemětřesením v reálném čase ( RT-QuIC ) je vysoce citlivý test pro detekci prionů .
Technika
„Třesení“ ve jménu techniky odkazuje na skutečnost, že vzorky v testu RT-QuIC jsou doslova vystaveny třepání. Tato akce rozbije agregáty prionového proteinu (PrP), které se poté dále inkubují, čímž se množství chybně složeného PrP zesílí na detekovatelné úrovně.
Je to „časný, rychlý a specifický test na prionová onemocnění“. It vzorky mozkomíšního moku (CSF) a proto je použitelný pro klusavky u ovcí, chronické chřadnutí (CWD) u jelenovitých, bovinní spongiformní encefalopatie (BSE) u krav a sporadické Creutzfeldt-Jakobovy nemoci u lidí, mezi ostatními.
Test RT-QuIC používá v přebytku rekombinantně produkované normálně skládané priony, často zkrácený protein syrského křečka, aminokyseliny 90-231. Přidají se vzorky, u nichž je podezření, že obsahují špatně složené priony, což vede k nesprávnému složení a agregaci normálně složených prionů. Tyto proteinové agregáty mohou být detekovány thioflavinu T viditelné spektrum fluorescenční detekcí . Na Centra pro kontrolu a prevenci nemocí zahrnuje pozitivní výsledky RT-Quic ve svých diagnostických kritérií pro pravděpodobný diagnostiku sCJD.
Testy RT-QuIC lze také použít k testování scrapie, BSE, CWD a sCJD. Citlivost a specificitu mohou zlepšit různé postupy. Extrakce kovu oxidem železa (IOME) využívá afinitu prionového proteinu k přirozenému kovu; vzorek se inkubuje s magnetickými kuličkami, které se vážou na prionový protein. Frakce kuliček bohatých na prion je následně sklizena a testována.
Běžně testovanými tkáněmi jsou mozkové homogenáty a lymfatické tkáně, ve vzorcích kůže a krve však byly detekovány priony. Testování určitých tkání na priony může být obtížné. Například vzorky krve mívají nízké hladiny cirkulujících intracelulárních prionů, stejně jako inhibitorů.